定量蛋白質組

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iTRAQ/ TMT定量蛋白質組

iTRAQ和TMT是分別由美國AB Sciex公司和Thermo公司研發的多肽體外標記定量技術, 采用8種或10種同位素標簽,通過特異性標記多肽的氨基酸基團, 一次上機可實現8種或10種不同樣本中蛋白質的相對定量,是近年來定量蛋白質組學常用的高通量篩選技術。

技術原理

iTRAQ和TMT原理類似,以iTRAQ試劑為例,該試劑結構由報告基團、中性平衡基團和反應基團三部分組成。 不同報告基團及其相對應平衡基團的質量和都相同,而反應基團能與賴氨酸ε氨基和所有肽鏈的氨基末端連接,可標記所有氨基酸。 不同標記試劑與來源于不同樣品胰酶消化后的肽段結合,經過色譜分離,并通過一級質譜和二級質譜。 平衡基團在二級質譜時發生中性丟失,而報告基團在二級質譜低質量區域產生多個報告離子,其信號強度分別代表該標記樣品的表達量, 根據報告離子的峰面積計算同一蛋白質同一肽段在不同樣品間的比值,從而實現蛋白的相對定量。


技術特征

1. 通量高,不受樣本數目的限制

單次上機最多可以同時進行8個樣品(iTRAQ)或10個樣品(TMT)蛋白的鑒定和定量, 超過8個樣品(iTRAQ)或10個樣品(TMT)可以通過設置內參,形成搭橋,實現多次上機數據之間的比較,不受樣本數目的限制。

定量準確,重復性高

不同樣本標記之后混樣,統一處理、上機,與非標記定量樣本單獨處理、上機相比, 減少了樣本處理和上機造成的實驗誤差,提高了定量的準確性和重復性。

蛋白檢測范圍廣

無物種特異性限制,理論上可用于所有物種。蛋白范圍廣,胞漿蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白、分泌蛋白等皆可檢測。 蛋白豐度和分子質量跨度大,可檢測出低豐度蛋白、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。

技術路線


信息分析流程



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